在細(xì)胞學(xué)研究中，常常需要了解細(xì)胞的活力水平，而CCK8法是一種常用的細(xì)胞活性測(cè)定方法。本文將介紹CCK8法檢測(cè)細(xì)胞活力的原理、操作步驟和注意事項(xiàng)。
CCK8法利用細(xì)胞呈現(xiàn)代謝活躍狀態(tài)下的還原性代謝產(chǎn)物還原劑對(duì)其生物膜中的內(nèi)過(guò)氧化物酶體丙二醇氧化酶（Cytochrome C）進(jìn)行氧化，其產(chǎn)生的還原性產(chǎn)物再通過(guò)漆黑美黃（WST-8）呈現(xiàn)淺黃色產(chǎn)物，同樣可以還原為具有水溶性的漆黑明錳（formazan）。
漆黑美黃（WST-8）是一種清晰且易于溶解的鈍化卡寧類化合物，當(dāng)它被還原時(shí)，可以產(chǎn)生淺黃色的WST-8形式，接著黑色絡(luò)合物強(qiáng)賽?。╠ye compound Q）和另一個(gè)類似維生素C的還原劑N-乙酰-酚胺類，可轉(zhuǎn)化為水溶性的漆黑明錳（formazan）。這種技術(shù)方案比還原甲基藍(lán)法和SRB法更靈敏且輕巧易行。
1. 用PBS或其他類似緩沖溶液將細(xì)胞洗滌一下
2. 按照教材或生產(chǎn)商指示的方法將CCK8藥液加入細(xì)胞懸液，并在細(xì)胞孵育箱中孵育幾個(gè)小時(shí)，顏色會(huì)有變化，顏色深度代表著細(xì)胞活力的程度；或者，您也可以從細(xì)胞懸液中沉淀出細(xì)胞，然后用CCK8藥液進(jìn)行染色。
3. 根據(jù)驗(yàn)定知識(shí)對(duì)CCK8染色液的吸光度變化進(jìn)行分析。
1. CCK8藥液的染色液需記得完全遮擋光源，因?yàn)殛?yáng)光、燈光等光源都可能影響其準(zhǔn)確度，導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。
2. 操作前，有必要做好全面的實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生管理，杜絕灰塵和外部污染物的干擾。
3. 孵育溫度和時(shí)間、熒光探針液體量請(qǐng)按照使用說(shuō)明書操作，避免誤差。
CCK8法是一種快捷、實(shí)用而簡(jiǎn)單易行的細(xì)胞活性檢測(cè)技術(shù)，可以幫助研究人員更全面地了解細(xì)胞的代謝水平。希望本文對(duì)您有所幫助。
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